PCR反应的标准过程
标准PCR过程分为三个步骤:
DNA变性 :( 90 ℃ -96 ℃): 双链DNA模板在热作用下发生氢键断裂,形成单链DNA
退火 :( 60 ℃ -65 ℃): 随着系统温度的降低,引物与DNA模板结合,形成局部双链。
扩展 :( 70 ℃ -75 ℃): 在Taq酶的作用下 (在72 ℃ 左右,活性最佳),以dNTP为起始原料,从引物的3' 末端以5' → 3' 末端的方向延伸,以合成与模板互补的DNA链。
在变性、退火和延伸的每个循环之后,DNA含量加倍。如今,一些PCR可以在短时间内复制,即使Taq酶活性由于短的扩增区域而不是最佳的。因此,可以使用两步法,包括在60 ℃ 和65 ℃ 之间同时进行退火和拉伸,以减少一次升温和降低过程并提高反应速度。
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